GMP無菌實驗室的運行及管理

GMP無菌實驗室的運行及管理

一、室內環境管理

無菌實驗室設有無菌操作間、緩沖間和更衣間，無菌操作間潔凈度達到10000級，超凈臺潔凈度達到100級且室內溫度應保持在20~24℃，濕度保持在45%~60%[1]，此設置不僅滿足人體舒適度且又不利于室內微生物的生存。初效、中效過濾器需要6個月更換1次，高效過濾器需要每年更換1次，以保證室內潔凈度達到標準。紫外燈達到使用壽命會影響消毒滅菌的效果，應定期檢查更換，同時應加強其他指標的監測，如潔凈度、細菌菌落數、靜壓差和風量等。
二、物流管理
經過γ射線滅菌的細胞培養瓶、培養皿、移液管、離心管等用1000mg/L濃度的消毒液徹底擦拭器材表面，消毒后放置于傳遞窗中，紫外燈照射30min后方可帶入實驗室。高壓消毒的器材如止血鉗、治療盤、離心套管等要用包布包裹2層，經高壓蒸汽滅菌和烤箱烘干后使用。使用前應檢查物品包裹內外各種監測指示劑是否符合要求，再決定使用。貯存器材可放入無菌室的柜櫥內，若超過有效期應重新滅菌。進包裝間要嚴格洗手，穿工作衣、戴口罩、帽子，包裝前檢查包布、治療巾，應清潔干燥無破損，做到一用一洗一消毒，各類器材應光潔無銹、性能完好齊全。
外用3M化學指示膠帶封貼并注明品名、包裝者、查對者、滅菌期及有效使用期，各類滅菌包包扎應松緊適度、整齊，減少各種污染的機會。所有實驗室器材需在最外層傳遞窗中用紫外燈照射30min后方可帶入緩沖間。滅菌包需在緩沖間內剝去最外層包布后方可帶入無菌操作間。在無菌操作間內剝去內層包布后擺放到固定位置備用。實驗室內各種器材要排放有序，定期檢查，補充基數。為保證潔凈度，應嚴禁堆放雜物，以防污染。污敷料及垃圾廢液等應分別放入專用廢液缸和污物桶中，待操作完畢后移出實驗室。徹底清潔室內物品及地面，減少污物在室內的停留時間。

  對已污染或疑似污染培養基、細胞因子等應立即丟棄。實驗室設定了單獨的陽性工作區域，包括陽性無菌操作間、緩沖間和更衣間。陽性工作區域與陰性工作區域完全隔離，防止肝炎病毒通過血液及相關物品等感染陰性患者回輸的細胞，防止患者通過細胞回輸感染乙肝病毒。工作人員進入陽性區域后，不得再進入陰性區域，陽性間每次使用的洗手衣需加入1000mg/L濃度消毒液，洗滌晾干以備下次使用，每次進入陽性間所著一次性隔離衣在用后應棄于陽性間垃圾袋中，陽性液體污物應瓶裝密封后放入陽性間醫療垃圾袋中。陽性醫療垃圾袋從陽性間的傳遞窗中傳出，放入專用醫療垃圾桶中，由院內專人負責回收。

三、運行制度管理
工作人員于每次實驗操作前30min打開實驗室空氣凈化系統和紫外燈。如果實驗室長期不用，需要在實驗前3h打開空氣凈化系統，以提高空氣潔凈度。在潮濕季節使用時，打開紫外燈時間需適當延長，以加強消毒效果，保證實驗質量。進入無菌實驗室的人員要嚴格著裝，穿著經嚴格高壓蒸汽滅菌過的洗手衣、隔離衣、口罩、帽子及用10g/L過氧乙酸溶液浸泡后晾干的拖鞋。著裝程序如下：進入第一更衣間后脫掉外衣換一更拖鞋;隨即進入第二更衣間，穿戴經高壓蒸汽滅菌的一次性口罩帽子，著洗手衣換二更拖鞋，帶無菌橡膠手套;進入第三更衣間后著隔離服，換三更拖鞋，之后方可進入無菌操作間操作。
保持實驗室相對密閉狀態，嚴格控制人員進出，必要情況下需要工作人員互相溝通協調時，可通過房間對講電話聯絡，將工作人員出入次數降到最低，減少不必要的渦流形成，使室內的氣壓始終處于正壓狀態。各項操作要集中，操作過程要輕穩，不能在實驗室抖動衣物布類，以防止微粒在室間飛揚，保證室間空氣的潔凈。實驗室人員進入無菌操作間應衣帽整潔、修剪指甲，嚴格執行無菌技術操作。一切操作必須在百級凈化的超凈工作臺內進行，超凈工作臺在使用前需打開其紫外燈輻照滅菌30min以上，并同時打開超凈工作臺進行吹風。實驗中應保持無菌操作，拿取物品不要跨過無菌面;培養瓶不要過早打開，對于已開瓶口者要盡量避免垂直放置;吸管等不能觸及瓶口，以防細菌污染或細胞的交叉感染。每次操作過程中留取定量樣品進行細菌、真菌、支原體檢測，以檢查無菌操作的可靠性及細胞是否污染。操作完畢后應及時清理無菌實驗室。組織實驗室全體人員進行理論學習，明確無菌實驗室工作原理、環境要求，設置嚴格的工作流程，明確分工并強化責任技師有效的合作配合意識。
四、衛生清潔管理
清潔工作應在實驗室空氣凈化系統運行中進行，清潔工具采用不掉纖維的織物材料制作。一切清潔工作必須采用濕式打掃，每周進行1次徹底清潔。需用1000mg/L含氯消毒液擦拭房間桌、椅、墻壁、天花板以及轉凳、顯微鏡等固定在實驗室內的物體。用體積分數為75%的酒精擦拭培養箱、超凈臺和紫外線燈管。地板很容易藏塵(如人體皮膚、毛發的脫落、布類的纖維等)、藏菌等，是室內的污染源，應在吸塵器吸除后用1000mg/L含氯消毒液擦拭。抽風、回風口也易藏塵、藏菌，應重點拆洗清潔，以確保塵埃過濾效果。衛生清潔時應用10g/L過氧乙酸溶液浸泡消毒工作人員所穿的拖鞋，待晾干后再使用。每周進行徹底清潔時應將實驗室內物品如移液器、移液器槍頭、止血鉗、治療盤(蕁蕁上接第76頁蕁蕁)以及離心機套管等進行高壓蒸汽滅菌。清潔工作完成后，手術室凈化系統繼續運行時間一般不應少于30min。
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